三亚DNA鉴定中心模板DNA起始拷贝数不同,CT值即不同:起始拷贝数越高,CT值就越低。Ci值与标准摸板数量的对数值之间有严格的线性关系,利用系列标准棋板的CT值,制成标准曲线,根据待测样品的Cr值,即可通过标准|llI线确定待测样品起始的DNA数量。荧光实时定嫩PCR技术具有极高的灵敏度,可以测定极微堪的DNA,同时也具有极高人类特异性。
限制性核酸内切酶消化
限制性核i睃内切酶(rcstriction endonuclezse),简称限制酶,是来源于细菌体内的一类酶,能够识别双链DNA巾的特殊回文式序列(palindrome sequence),并能在识别序列内将DNA双链切断。限制酶活性要求稳定,酶的识别J芋列位于VN'rR序列的两翼,尽可能地靠近VNTR序列的5’端和3‘端。例如EcoR I的识
别序列为:
5'_GAATTC_3'
3’_CTTAA(r5’
经过EcoRI水解盾,在识别序列内非对称切断DNA双链-两断端为:
5‘-G AATTC-3'
3,-CTTAA +G-5-
两断端分别有突出的数个碱基,称为黏性末端。还有一种限制酶水解DNA后的断端没有伸出的单链碱基,称为平端。例如HaeⅢ切断DNA的序列与方式:
5'_GGCC_3r5'-GG -3 7
。,一CCG G-5/一。,.翟+墨;,
三亚DNA鉴定中心目前发现的限制酶有近500种,每一种限制酶_椰有特定的识别序列(表41).因为人类基因组DNA极其庞大,一种限制酶在人类基因组DNA可有许多的酶切识别点,消化过程中所有的识别点同时被切断,能与探针杂交的内切酶酶解的DNA分子都是特异性片段。
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