鉴定新闻

浓度影响引物退火及延fI|J时特异性碱基的掺入

来源： 中国亲子鉴定基因检测中心 日期：2012-07-03 点击： 0 属于： 鉴定新闻

三亚亲子鉴定反应缓冲体系PCR反应中缓冲液是—个重要的影响因索，尤其是其中的Mgz+能影响反应的特异性和扩增片段的产率。标准的缓冲体系为lOmrnol/LTris- HCl．pH8.3，50mmol/L KCI，1_5mmoUL Mgz+。Mgz+是Taq DNA聚合酶必需的激活离子，同时Mgz+浓度影响引物退火及延fI|J时特异性碱基的掺入。，。般的PCR反应中．Mg2+浓度介于1. 5-2. OmmoUL比较合适（对应dNTP浓度为200ymol/L左右）。Mg2+过量能增加非特异性扩增并影响产率。此外，三亚亲子鉴定反应体系中加入小牛血清清蛋白( bovine serum albumin，BSA，lOOfig/ml)或明胶(0.001%)，有利于聚合酶的稳定。

Taq DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶是从一种嗜热水生茵Thermusuquaticus YT-l菌株中分离提纯的，分子撮94kD．在70—75'C时具有最高的生物学活性，具有良好的热稳定性。该酶具有5’-3’聚合酶活性及5’一3I夕I．切酶活性，缺乏3’一57外切酶活性。因此，在PCR反应中．Taq DNA聚合酶没有引物3‘端错配碱基的校正功能。使用Taq DNA聚合酶，反应中出现碱基的错配率为2.1×101左右。

上一篇：当两个遗传标记处于连锁不平衡状态时

下一篇：探针长度的基础上显著提高探针的融链温度

栏目导航